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組織芯片制備

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組織芯片制作流程實例

2020-12-14

通過組織芯片制作機細針打孔的方法,從眾多的組織蠟塊(稱為供體蠟塊,donor)中采集到數十至上百的圓柱形小組織(組織芯,tissue core),并將其整齊排列另一空白蠟塊(稱為受體蠟塊,recipient)中,而制成組織芯片蠟塊。然后對組織芯片蠟塊進行切片,再將切片轉移到載玻片上制成組織芯片。


1、芯片微陳列設計:在構建組織芯片之前,應該預先計劃檢測多少樣本,然后相應地進行設計。對大多數研究來說,在一個常規的載玻片上放置60~100個樣本已經足夠了。當樣本超過100例時,上樣、切片、染色及研究各個步驟都要求相當熟練,并且由于樣本排列過于緊密,有可能導致芯片制作和研究失敗。因此在計劃檢測數百個到上千標本時可考慮多做幾個組織芯片。


2、收集病例及相關蠟塊:挑選出具有隨訪資料的不同發展階段的腫瘤組織蠟塊,根據HE切片對石蠟標本中有代表性的點進行標記,包括典型的腫瘤和相應的正常組織,以構建腫瘤組織芯片。


3、TMA受體蠟塊制備:取97.5克萊卡石蠟+2.5克蜂蠟(2.5%)混合,制成長36mm*寬26mm*高17mm的空白蠟塊,在該蠟塊20mm×16mm范圍內設計10×8點組織陳列。組織四周預留0.5cm-0.7cm空間,用組織儀打孔制成TMA蠟塊。


4、在組織芯片制作機上用細針對受體蠟塊打孔,孔徑以1~1.5mm比較適宜。


5、同樣在供體蠟塊上標記的相應部位打孔采集組織芯??讖酵瑯訛?~1.5mm。


6、將組織芯轉移到受體模塊的孔中,每個組織芯之間的間距以0.2mm為佳。


7、為了防止在打點、切片、染色或免疫組化過程中出現漏點,滑片及掉片現象,每個樣本可以上樣1-2個點。


8、將構建好的TMA芯片蠟塊放在相宜的塑料盒子內,并嚴密固定防止移位。放入55℃溫箱中約10分鐘,在蠟將要完全溶解前,取出室溫下冷卻,使受體模塊的蠟與新插入的小圓柱狀組織溶為一體,取下蠟塊,于4℃冰箱中保存備用。


9、切片前,蠟塊需在4℃中預冷4h左右,然后夾在切片機上進行修正,等修到全部組織完整為止。用-20℃預冷冰袋貼在蠟塊上5-10min左右,快速連續切片30-50張左右,再用冰袋冷凍組織塊,或直接在冰凍切片機內進行,直至將組織切完為止。將4μm連續切片分別漂在涼水中,讓其自然展開,按順序將切片轉移至45℃的溫水中展片2min左右,將其貼在浸有APES切片黏合劑的載玻片上晾干,60℃中烤片3min左右,58℃中繼續烤片18h,-20℃保存備用。



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